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多肽的保存

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多肽的保存

发布日期:2019-11-16 作者:江苏吉泰肽业科技有限公司 点击:

多肽在-20°C很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中.在将它们是露于空气之前,冷冻干燥多肽可以放于室温这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时 ,最好的方法是冯小的工作样量存放。
对于含Cys. Met oτTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其滨解心不可少,因为这种多肽可易空气氧化,在封瓶前,慢慢流讨多肽的气气或氢气也会降低氧化作用。含Gin或Asn的多肽也容易降解, 所有这些状与不含这些有问题解者的那些肽相比,生命期有限。多肽的溶解性
大多数队的首选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别刘于碱生或酸性多队的溶解很重受。这些乃法不溶的多服,需要DMF.脲、guanleInlam chlorldesiacetonltnle米溶解,这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。
残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。
您需要特殊的多肽或任何技术帮助,请随时与我们联系。我们包你完全满意;对丁我们不能适当台成的顺序;我们不收费。多肽的保存和操作
包装1mg或更少的多肽按净重包装,声明的小瓶重不含相关抗离子和水。例如,氦其酸分析决定的肽含量是80%,在1mg样品中,那么瓶中专重是1.25mg。大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水,例如, 25mg样品中肽百分比为90% ,那么,实际肽量为25mgx90%=22.5mg
不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%,而肽含量相关带电基团(如Arg,lys) 的抗离子量和肽亲水性决定。这是合成肽的本身特性。冻干肽的保存所有产品应存于冰箱。最好为-20C.多数肽以此方法可以存放几年不变.肽溶液的保存
溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性pH(pH5-7), -20*C保存的,为群务样品的反复冻融,最好分成小样存放。 -份样品融冻后未用宗,应扔掉,细荣降解有时会成为浴波肽的麻烦,为完服此;肽应浴于无菌水,或肽溶汝用D.2μ M洁膜过滤。多队的重建和操作
多数肽溶于无菌蒸留水。初次溶解时, 要注急使初始浓度比要求浓度人;如果多肽仅有限溶解性,这更允许加入其它溶解剂或缓冲盐。如果多肽在水中的溶解性有限,有几种选择可帮助溶解;对碱性肽用稀乙酸(含Arg,Lys,llis)酸性肽用稀氨水(含Asp,Glu)
对极疏水的肽用10%有机修饰物( Acetonitnile , Methanol)极不溶的肽用DM50或DMF guani:line hydrochloride或脲的浓溶液也很有用,与上述方法合用,声处理也是溶解多肽的有效手段.多肽应用和保存
多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成_级结构。 除了最太肽外,这宗都会发生,在有多重疏水残基的肽中更显善。盐会促进_级结构形成。 我J建议先在无菌蒸馏水或去离子4溶解多服。如需要勖溶解率,可用声处理。溶解仍有问题,加少重稀乙酸(10%)或氨水,会更于溶解。
要长期保存多肽,最好冷冻干燥,冷干粉可在20C或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。多肽易受细菌降解 ,应用无菌纯化小水溶解。
含有Met Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化,寿命有限。应溶于无氧溶剂,为防山重复冻融的破坏,建议溶解过量的驮的便实验,其余多肽以固体形成保存。HPLC分析和纯化
分析HPLC使用柱子和泵系统, 可以经受传递高压,这样可以用极细的微粒(3-10μm)做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。
HPLC分两类:离子交换和反相。离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。 柱子在-定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子休,而多肽或多肽混合物,由其氦其酸组成表现出相反电荷。分离是一 种电荷相互作用, 通过可变PH,离子强度,或两者洗脱出多肽,通常,先用低离子强度的溶液,以后逐渐加强或一5-步加强 ,直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个列子使用强阳离子交换柱.如sulfnethylaspartimide: 面过酸性PH中带正电来分离.
反相HPLC条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上,用降低离子强度洗脱,如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成,这种链长度为G4-G8碳原子。由于洗脱是-种疏水作用。长链柱比短链对小的,高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。然而,总体实践中,这两类柱互变无多少显著差别,别,类载体由碳水化合物构成,比如苯基。
典型的操作常由两绶冲剂组成, 0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile.用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6x 250mm(3-10μ m)和22x 250mm(10μ m).如果用径向填柱,那么大小是8x100 (3-10μm)和25x250mm(10μm)
大量各种缓冲剂含许多不同试剂,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸,稀He formic酸(5-6%,pH2-4), 10-100mM NH4HCO3,醋酸钠/氨, TFA/TEA ,磷酸钠或钾,异戊酚。这样许多不同组合可形成缓冲剂,但要注意一点:硅反相柱料不能长时间暴露于高pH,甚至微碱pH,因为这样会破坏柱子。

以上就是多肽合成给大家介绍的相关内容,希望对大家有所帮助。

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