不同多肽原则上需要单独开展微生物检测方法验证，但可根据多肽的结构特性、制剂类型、抑菌活性、生产工艺的相似性，采用分组验证的方式简化流程，无需对每个多肽逐一重复全项验证。以下是具体判定逻辑和执行原则：
一、 必须单独验证的情形
当多肽之间存在以下差异时，微生物检测方法无法直接通用，需单独验证：
抑菌活性差异显著
多肽的抑菌性与其氨基酸序列、电荷性质、空间结构直接相关：
阳离子多肽（如富含赖氨酸、精氨酸的多肽）、抗菌肽类，天然具有抑制细菌 / 真菌生长的能力，需针对性验证薄膜过滤法的冲洗体积、中和剂种类；
非抑菌性多肽（如部分激素类多肽）则可采用常规稀释法，两者的方法学完全不同。
例：抗菌肽 A 与生长激素多肽 B，因抑菌活性差异，必须分别验证。
制剂类型不同
不同剂型的样品前处理方式、微生物污染风险不同，方法需单独验证：
无菌制剂（注射用冻干多肽、注射液）：需验证无菌检查法（直接接种 / 薄膜过滤）；
非无菌制剂（外用软膏、口服片剂）：需验证微生物限度法（需氧菌总数、控制菌）；
含特殊辅料的制剂（如含防腐剂、表面活性剂的多肽喷雾）：需验证辅料对微生物的影响及中和方法。
生产工艺与基质差异大
合成多肽与重组多肽的基质杂质不同（如合成残留的三氟乙酸、重组多肽的宿主蛋白残留），可能影响微生物生长；
不同纯化工艺（如 HPLC 纯化、离子交换层析）的样品纯度、杂质谱差异，需单独验证基质干扰的消除方法。
二、 可分组验证的情形（无需单独验证）
当多个多肽满足以下一致性条件时，可选择代表性多肽进行验证，结果可覆盖同组其他多肽：
核心特性一致
氨基酸序列的电荷性质、分子量范围、抑菌活性无显著差异（如同一家族的非抑菌性多肽）；
制剂类型相同（如均为注射用冻干多肽）、辅料组成一致（如均使用甘露醇作为冻干保护剂）。
生产工艺与基质一致
采用相同的合成 / 表达工艺、纯化路线、制剂配方；
样品前处理方式相同（如均用 pH 7.0 氯化钠 - 蛋白胨缓冲液溶解稀释）。
分组验证的执行要求
每组需选择抑菌活性最强、基质最复杂的多肽作为代表（如组内某多肽含微量抑菌杂质，优先选其验证）；
验证方法需覆盖组内所有多肽的浓度范围，确保方法适用性。
三、 法规层面的核心要求
各国药典（ChP、USP、EP）均要求检测方法需适用于具体样品，未强制 “每个多肽单独验证”，但需提供分组验证的合理性依据：
需提交同组多肽的结构对比、抑菌活性对比、工艺一致性证明；
若后续多肽的工艺或配方发生变更，需重新评估方法适用性，必要时补充验证。

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