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收到多肽后该如何处理和保存多肽?

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收到多肽后该如何处理和保存多肽?

发布日期:2019-09-25 作者: 点击:

冻干粉形式的多肽,经密封包装可在常温条件下稳定运输,溶解状态的多肽不宜长期保存。


多肽保存指南:需要长期保存的多肽,应以冻干粉形式存放在含有干燥剂的密封容器内,置于-20℃保存,-80℃效果更好,可以最大限度地避免多肽降解。这种储存方式可以使多肽可保存数年,避免了被细菌降解和氧化,也可以避免二级结构的形成。


打开包装: 在打开包装和称重前,请先将多肽在干燥器中平衡至室温。因多肽往往具有吸湿性,未经平衡到室温的多肽在打开盖子后易凝结,从而降低了多肽产品的稳定性。


称重: 迅速称取您所需的多肽,并将剩余多肽继续储存在-20°C或更低温度。与其他多肽相比,含有半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和谷氨酸N -末端的多肽保存期更短。


问: 什么是多肽的纯度?

答: 多肽的纯度是指HPLC方法在214nm处检测到的目标多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长),紫外分光光度计检测不到水和残留的盐分。但可发现其他的杂质包括:缺失序列(缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列),截断序列(加帽过程中产生的序列)脱保护不完全序列(产生于整个合成过程或最后的裂解过程)。


多肽纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会产生少量的TFA,如:游离的氨基末端和其他侧链如Arg、Lys、His都可生成少量TFA杂质。通常交付的多肽多含有微量TFA和残留水。即使处于冻干状态,水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着。


在多肽中还存在哪些物质(杂质)?


杂质

纯化前的多肽

纯化后的多肽(HPLC)

缺失序列1

Y

Y

截断序列2

Y

Y

脱保护不完全序列3

Y

Y

裂解过程中被修改的序列4

Y

Y

DTT (dithiothreitol,二巯基苏糖醇)

Y

N

TFA (trifluoroacetic acid,三氟乙酸)

Y

Y

Acetic acid(醋酸)

Y

N

某个氨基酸发生了副反应的多肽,如脯氨酸异构化等。

Y

Y

纯化前的多肽中包含的杂质包括多肽和非多肽物质, 纯化后的多肽中包含的杂质除了TFA盐,大多数为序列被修改的多肽。


缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列

为避免缺失序列的产生而进行的加帽操作,截断序列即产生于加帽过程中

产生于整个合成过程或最后的裂解过程

保护基重新附着在多肽的其他位置

问: 纽普生物如何对合成的多肽进行质检?

答: 所有合成肽都经过HPLC和MS分析,并提供相应的检测报告。所有多肽均采用反相色谱法纯化,以质谱法测定肽的分子量来确定产品是否正确,MS检测结果还可显示大部份的主要杂质。如果必要,还可提供肽净含量检测,如氨基酸分析或元素分析。这些方法可以证实多肽的氨基酸组成,他们均可作为多肽确认的补充方法。所有交付的肽均达到了客户要求的纯度。没有达到纯度要求的那些多肽均被丢弃。当然如果客户需要,也可以发送给他们。


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